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HPLC保留時間漂移的故障排除!

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發布時間:
2020/07/17 10:39
保留時間不重現有兩種不同的情況:既保留時間漂移和保留時間波動。
前者是指保留時間僅沿單方向發生變化,而后者指保留時間無固定規律的波動。將此兩種情況區分開來對找到問題的原因往往很有幫助。如,保留時間的漂移往往由柱老化引起;而柱老化不可能引起保留時間的無規律波動。
事實上,保留時間漂移的多半原因是不同機理的色譜柱老化,如固定相流失(例如通過水解),色譜柱污染(由樣品或流動相所致)等。
保留時間漂移的幾種最常見的原因如下:
? 色譜柱平衡
如果我們觀察到保留時間漂移,首先應考慮色譜柱是否已用流動相完全平衡。通常平衡需要10-20個柱體積的流動相,但如果在流動相中加入少量添加劑(如離子對試劑)則需要相當長的時間來平衡色譜柱。  流動相污染也可能是原因之一。溶于流動相中的少量污染物可能慢慢富集到色譜柱上,從而造成保留時間的漂移。應注意:水是很容易污染的流動相成分。  
? 固定相穩定性  
固定相的穩定性都是有限的,即使在推薦的PH范圍內使用,固定相也會慢慢水解。例如,硅膠基質在pH4時水解穩定性最好。水解速度與流動相類型和 配體有關。雙官能團配體和三官能團配體比單官能團配體的鍵合相要穩定;長鏈鍵合相比短鏈鍵合相穩定;烷基鍵合相比氰基鍵合相穩定的多。  經常清洗色譜柱亦會加速色譜柱固定相的水解。其他硅膠基質鍵合相在水溶液環境中也可以發生水 解,如氨基鍵合相等。
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